利什曼原虫IgG ELISA试剂盒

中文名称：利什曼原虫IgG ELISA试剂盒

英文名称：Leishmania IgG ELISA kit

产品规格：96T

预期用途

利什曼原虫IgG ELISA试剂盒可用于人血清中抗内脏利什曼原虫IgG的筛查检测。

前言说明

内脏利什曼病（VL）是一种死亡率的恶性疾病，主要由杜氏利什曼原虫引起。白蛉是VL传播的主要媒介，而狗是白蛉的主要携带者。VL是许多国家的一种地方性疾病，在大多发展中国家中，VL也是一个严重的问题，特别在那些人口集中的城市里。这种疾病在拉丁美洲、东非、中东、印度和中国都有很高的。VL也会传播到靠近地中海的一些国家去，如意大利、法国南部、西班牙、葡萄牙和非洲南部。

在欧洲南部，VL已成为AIDS中主要的机会性传染病。急性VL的诊断通常是通过抽吸骨髓来直接鉴别其寄生虫。这种鉴定方法对人体有侵袭性，并且危险，而且经常因不能从组织中分离到寄生虫而使得鉴定的成功率非常小。另外，在急性疾病阶段，抗体的滴度非常高，血清筛查的方法已广泛被应用。ELISA应当是VL血清学诊断的*实验方法，尽管免疫荧光抗体检测和直接凝集实验检测的是整个寄生虫，但它们仍然被广泛应用（ELISA一起用或单独用）。

实验原理

在第一次温育时，血清中的抗体结合到检测孔的抗原上。在第二次温育时，酶复合物可结合到抗原抗体复合物上。洗板除去未结合的酶联物，加入显色剂，有酶联物和过氧化物酶的情况下会显示蓝色。之后加入终止液终止酶反应，此时溶液由蓝色变成黄色。

利什曼原虫IgG ELISA试剂盒组成成分

1）包被了利什曼原虫抗原的微孔板，96孔。

2）酶联物：1瓶，内含11ml 辣根过氧酶标记的抗人IgG和含硫柳汞的稳定缓冲液。

3）阳性质控：1瓶，内含1ml 稀释好的利什曼原虫阳性人血清和含硫柳汞的缓冲液。

4）阳性质控：1瓶，内含1ml 稀释好的利什曼原虫阴性人血清和含硫柳汞的缓冲液。

5）显色剂：1瓶，内含11ml TMB显色剂。

6）浓缩洗涤液：20倍浓缩，内含25ml浓缩的缓冲液和含硫柳汞的表面活性剂。

7）稀释缓冲液：2瓶，内含30ml含硫柳汞的蛋白缓冲液。

8）终止掖：1瓶，内含11ml 1M的硫酸。

实验步骤

1）取出实验所需数目的板条并置于板架上。

2）在微孔1中加入100ul阴性质控，微孔2中加入100ul阳性质控，剩余的孔中分别加入100ul 40倍稀释的样品。

3）注意：阴性质控和阳性质控都是以预先稀释好了的，不必再稀释。

4）室温温育10min。

5）弃取孔内反应液，用洗涤液洗板3次。

6）在每一微孔中加入2滴酶联物。

7）室温温育10min。

8）弃取孔内反应液，用洗涤液洗板3次。

9）在每一微孔中滴加2滴显色剂。

10）室温温育5分钟。

11）在每一微孔中滴加2滴终止液，振板以使溶液混合均匀。

12）加终止液后450nm处读取OD值（参考波长：620-650）。

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