产品展厅
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人高迁移率族蛋白测定试剂盒（ELISA）
通用名称：人高迁移率族蛋白测定试剂盒（ELISA法）
英文名称：HMGB1 ELISA
产品规格：96T
试剂盒的预期用途
高迁移率族蛋白B1试剂可用于定量测定人血清和血浆中的HMGB1含量。此外，该试剂盒可用于来自牛，猪，兔，小鼠和大鼠的血清，血浆和脑脊液（CSF）的研究。也可以检测细胞培养基和BALF（肺泡液）。
HMGB1简介
HMGB1是大约30kDa的蛋白质，是非组蛋白核蛋白组的主要成分。HMGB1（高迁移族Box1蛋白）是转录调节因子，通常存在于哺乳动物细胞的细胞核和细胞质中。
HMGB1在恶性疾病等疾病的机理中起重要作用。在的情况下，细胞的氧供应可以断开。这导致细胞死亡（坏死）和释放HMGB1，进而导致在相邻环境中形成朝向的生成。这些确保的存活和进一步的生长。
体外研究表明，通过定量测定HMGB1浓度，可以区分病理性细胞死亡（坏死）和生理细胞死亡（细胞凋亡）。在坏死中观察到更高的HMGB1值。
HMGB1在脓毒性休克后期也起重要作用。结果表明，即使在脓毒性休克后期，HMGB1在动物实验中的抑制显着提高了啮齿动物的存活率。
HMGB1通过与RAGE（“晚期糖基化终产物的受体”）结合起作用，具有与细胞因子TNF-α和IL-6相似的促炎作用。脓毒症患者血清中也可见高值。
血液中的HMGB1浓度在许多其他疾病中也增加，包括（RA）急性肺损伤（ALI）和弥散性（DIC）。
HMGB1 ELISA由Ikuro Maruyama博士和Shino-Test Corporation（日本）开发。本产品由Shino-Test公司授权的IBL制造。
检测原理
HMGB1 ELISA是用于定量测定血清和血浆中HMGB1的夹心酶免疫测定。微量滴定板孔用纯化的抗HMGB1抗体包被。样品中的HMGB1特异性结合固相的抗体，并被 个酶标记的抗体识别。底物反应后，HMGB1的浓度与颜色深浅成正比。
高迁移率族蛋白B1试剂组成成分
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数量 |
标签 |
组成 |
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1 x 12 x 8 |
MTP |
微孔板可拆卸，包被有抗HMGB1多克隆抗体 |
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1 x |
ENZCONJ LYO |
酶标记物冻干粉含有与过氧化物酶结合的HMGB1，2。 |
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1 x |
CAL LYO |
标准品冻干粉含有猪HMGB1，稀释见章节10.1 |
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1 x |
CONTROL+ LYO |
阳性质控冻干粉含有猪HMGB1，稀释见章节10.1 |
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1 x 20 mL |
DILBUF |
稀释液即用型，含有：缓冲液，0.01 % NaN3. |
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1 x 12 mL |
ENZCONJ DIL |
酶标记物稀释液即用型，含有：缓冲液 |
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2 x 100 mL |
WASHBUF CONC |
洗涤液5X浓缩含有：磷酸盐缓冲液，<0.5 %Tween 20. |
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1 x 6 mL |
COLREA A |
底物液A即用型。含有：TMB |
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1 x 6 mL |
COLREA B |
底物液B即用型，含有：0.005M的过氧化氢 |
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1 x 12 mL |
COLOUR STOP |
终止液即用型，含有：0.35M硫酸 |
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2 x |
FOIL |
盖板膜
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检测所需材料（未提供）
1.微量移液器（Multipette Eppendorf或类似设备，CV <3％）。体积：10; 20; 100; 100-1000μL
2.涡街搅拌机
3.轨道摇床（500 rpm）
4. 8通道微量移液器
5.洗瓶，自动或半自动微量滴定板清洗系统
6.能够读取450nm吸光度的酶标仪（参考波长600-650nm）
7.双蒸水或去离子水
8.纸巾，吸头和定时器
9.聚苯乙烯（PS）或聚丙烯（PP）管用于标准和样品稀释
10. + 37°C和+ 25°C孵育箱
储存条件
高迁移率族蛋白B1试剂在环境温度下运输，储存应在2-8℃。远离热源或阳光直射。样品和制备的试剂的储存和稳定性在相应的章节中有描述。开封的微量滴定板条在试剂盒的有效期限内保持稳定，但应在密封的袋子中储存在2-8℃。
样本要求
本试剂盒可用于检测血清、血浆（EDTA作为抗凝剂）
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应注意穿刺的通常预防措施。在1000g离心15分钟后，立即从血液收集装置收集血清/血浆。 如果离心不足或血清/血浆与血细胞接触相当长的一段时间，HMGB1水平可能由于细胞溶解而增加。 |
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保存 |
2-8°C(等分分装) |
-30°C(等分分装) |
-80°C(等分分装) |
避免热源和阳光直射，避免反复冻融 |
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稳定性 |
24h |
6个月 |
12个月 |
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HMGB1也可以在细胞培养上清液，脑脊液（CSF）和肺泡液（BALF）中测量。在胎牛血清（FBS）中的细胞培养上清液的情况下，测量的是牛HMGB1。因此，也应该测试阴性对照。
检测步骤
1) 将100μL的预稀释标准品、对照和样品放入各自的微孔板中
2) 用封板纸覆盖，在37°C下孵育2小时
3) 弃去微孔中溶液，用400μL稀释的洗涤缓冲液清洗底板5次。通过在纸巾上的倒置微孔，拍打，除去多余的溶液
4) 加入100μL酶联物到每个孔中
5) 用封板纸覆盖，在25°C下孵育1小时
6) 弃去微孔中溶液，用400μL稀释的洗涤缓冲液清洗底板5次。通过在纸巾上的倒置微孔，拍打，除去多余的溶液
7) 加入100μL预混合底物液
8) 室温(18-25°C)在黑暗中孵育20 min
9) 加入100μL终止液液，终止酶促反应。通过轻轻地摇晃微孔板，简单地混合内容物。
10) 在加入终止液后60 min内，用酶标仪在450nm(参考波长：600-650nm)处测量吸光度。
【结果计算】
1) 得到的标准品的OD值(y轴，线性)与它们的浓度(x轴，对数)绘制在半对数图表纸上或使用自动方法。三次样条、4参数逻辑具有良好的拟合性。
2）对于标准曲线的计算，应用标准的每个信号（可能省略一个明显的重复离群值，可能使用更合理的单个值）
3）样品的浓度可以直接从标准曲线中读取。显示浓度高于 标准的样品必须按照预检测设置说明中的描述进行稀释，并重新进行检测
4）如果是稀释的样品，该值必须乘以相应的稀释系数。
想了解更多产品信息，欢迎咨询我们，来电可免费获取技术资料，在线技术答疑。
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