登 革热NS1 Elisa

（美国Inbios）

预期用途

此试剂盒用于登 革热病毒的早期检测，通过酶免分析法检测人血清中的NS1抗原。它可以在IgG和IgM抗体出现之前对人血清中的登 革热病毒的进行早期诊断。此试剂盒不能用于筛查血液或血液成分，仅用于研究。

简介

登 革热是一种急性 病 毒 性疾病，它主要通过埃及伊蚊传播。登 革热在临 床上主要表现为：双相热、皮疹和造血抑制，还可表现出全身症 状，如浑身不舒服、关 节 痛、肌 肉疼 痛和头 痛，有时还可能出现极为罕见的出血性高烧，并可能导致致命性的休克。登 革热主要流行于热带和亚热带地区，大概每年会发生100,000,000例。据统计，每年大概会出现500到1000万例登 革热病 人，同时还会出现250000到500000例登 革热出血 热。在2002年，据报道，30多个拉丁美洲的国家出现10000000例登 革热病 人，并且大多数是登 革热出血 热（DHF）病 人。之后在2003年到2005年，在印度的一些地方也广泛流行DHF。在美国，据报道，DHF病 人在1996到2002年就增加了三倍。据报道说，登 革热也在夏威夷和德克萨斯州的拉雷多爆发过。由于病毒的潜在传 染性，一些病毒包括登 革热都被列为CDD的A类潜在传染原。登 革热NS1（非结构蛋白）蛋白是一个六聚体分泌的蛋白。它是病毒RNA复制中重要的角色，它强烈的免疫原性引起抗体和补体的活性。在急性感染血液中可检测到NS1抗原。此试剂盒可检测即时感染患者血清中的NS1抗原。

实验原理

此试剂盒具有高灵敏度，快速和可靠性分析，采用夹心法检测血清中低含量的NS1。

质控和未知血清样品用样品稀释缓冲液稀释。微孔中包被高效的NS1抗体，封闭，样品中的NS1抗原被捕获，与二抗形成夹心。通过辣根过氧化物酶和TMB底物显色液产生的颜色反应来判断NS1抗原，用酸溶液终止反应，然后用酶标仪在450nm处读取吸收值。阴性和阳性血清测得的值作为样品中NS1抗原的诊断依据。

试剂盒组成

1. 微孔板：96孔，2-8℃下保存至有效期

2. 阴性质控：1x300μL，有助于试剂盒有效性的验证，2-8℃下保存至有效期，含有沉淀物的话使用前应离心

3. 阳性质控：1x300μL，有助于试剂盒有效性的验证，2-8℃下保存至有效期，含有沉淀物的话使用前应离心

4. 临界质控：1x300μL，检测临界值，2-8℃下保存至有效期，含有沉淀物的话使用前应离心

5. 样品稀释液：1x15ml，含有二抗，Proclin（0.02-0.03%）作为防腐剂，2-8℃下保存至有效期

6. 酶联物：1x150μL,100X，含有辣根过氧化物酶标记的多克隆抗体，使用前混匀，2-8℃下保存至有效期

7. 酶联物稀释液：1x12ml,用于100X酶连液的稀释，直接将酶联物加入此溶液即得到100X的酶连液，，配制液在2-8℃下可保存2周。未开封的稀释液2 -8℃下保存至有效期。

8. 洗涤缓冲液：120ml，10X，2-8℃下保存至有效期

9. TMB底物液：1x12ml，2-8℃下保存至有效期

10. 终止液：1x6ml，室温下保存至有效期

实验所需材料但试剂盒未提供

1. 酶标仪

2. 去离子水或双蒸水

3. 真空泵

4. 37℃孵箱

5. 1-10μL的单通道移液器，50-200μL单通道和多通道的移液器

6. 聚丙烯试管或96孔稀释板

7. 保鲜膜

8. 计时器

9. 混合器

样品采集和准备

1. 此试验只能使用人血清，由于试剂未得到优化，所以不能直接用于全血或血浆的检测

2. 从红细胞凝块中提取出血清，不能使用溶血

3. 样品采集后应尽快进行实验，不要将血清长时间放置在室温下

4. 采取静 脉穿刺采血，样品在2-8℃下可保存7天，-20℃或更低温度可保存30天，想要保存更长时间，应贮存在-70℃，避免反复冻融

5. 使用前应将冻存的样品在室温下溶解

6. 如果血清是需运输的，则需根据联邦感染试剂运输法规进行包装运输

实验步骤....................

试剂准备.................

步骤.........................

结果计算...................

临界值的计算：

流行质控血清不能用于临界值的计算，建议用地方性相关人群的血清进行临界核实

结果说明：OD值≥临界（ISR≥1）认为是阳性，含有NS1抗原。OD值接近临界值的（1.1＞ISR＞0.9）应重复做一次再来确定。

本译文仅供参考，详情请以原文为准