DENGUE IgG INDIRECT ELISA（登 革热IgG间接酶联免疫法检测试剂盒）

产品目录号 E-DEN01G

预期用途

Panbio Dengue IgG Indirect ELISA 用于定性检测血清内抗登 革热抗原血清型 (1、2、3 和4) 的 IgG 抗体，可作为辅助手段，供临床实验室诊断出现登 革热临床症 状和既往接触史的患者。

简介

虫媒病毒的登 革热病毒组通过蚊子传播，主要是埃及伊蚊 (Aedesaegypti) 和白纹伊蚊 (Aedes albopictus)。登 革热感染与发热性疾病有关，其特征是发热骤起、强烈头 痛、肌 痛、关 节痛和皮疹。登 革热感染的严重并 发症包括登革出血 热和登革休克并 发症。此类并 发症的患病增加数与不同登 革热病毒血清型的二次感染有关。

利用 ELISA 检测 4 种登 革热病毒血清型的 IgG 类特异性抗体，有助于诊断登 革热病毒的既往接触史。配对血清中出现 IgG 水平升高，则表示有活动性登 革热感染。常规使用血凝抑制 (HAI) 滴度来将感染划分为初次感染与二次感染。虽然 HAI 滴度 ≥1:2560 的任何急性期

标本即可被定义为黄病毒二次感染患者标本1，不过当前的定义尚依赖于对时间上相隔至少 7 日的配对血清标本的分析。

原理

当血清抗体存在时，它将与登 革热病毒抗原的组合相结合，其中登 革热病毒抗原结合至微量孔检验板条的聚苯乙烯表面。通过洗涤去除残余的血清，然后添加过氧化物酶标记的抗人 IgG。 洗涤微量孔并添加无色的底物系统 － 四甲基联苯胺/过氧化氢 (TMB 色原)。底物由酶分解，色原变成蓝色。在用酸终止反应后，TMB 变成黄色。显色

表明检验样品内存在登 革热 IgG 抗体。

提供的材料

1. 登 革热病毒抗原(血清型1、2、3、4)包被的微量孔 －(12x8孔)

2. 洗涤缓冲液

3. 样品稀释液

4. HRP 标记的抗人 IgG

5. TMB 色原 (TMB)

6. 阳性对照品

7. 校准品

8. 阴性对照品

9. 终止溶液

这些成分中的叠氮化钠浓度是有害的，适用于风险术语 R22、R32：“吞食有害”和“遇酸产生极毒气体”。

所需其它材料（并未提供）

(1) 精密可调节的微量加样器，具有可弃置的吸头

(容量 5-1000 μL)

(2) 去离子水

(3) 微量板洗涤系统

(4) 具有 450 nm 滤光片的微量板读数仪

(5) 计时器

(6) 刻度量筒

(7) 烧杯

(8) 用于血清稀释的试管或微量滴定板

注意事项

用于体外诊断

(i) 制备对照品所用的全部人源材料已接受抗人免 疫缺 陷病毒 1 和2 (HIV1 和 2)、丙 型肝 炎病毒 (HCV) 抗体以及乙 型肝 炎表面抗原检验，发现均为阴性。然而，目前尚无检验方法能够完全确保其安全性，故应将所用人对照孔和抗原包被孔作为潜在的感染性材料处理。 美国Centers for Disease Control and Prevention（疾病控制和预防中心）和 National Institutes of Health（国立卫生研究院）推荐在 2 级生物安全水平下处理潜在传染物2。

(ii) 该检验应当仅在血清上开展。尚未建立对全血、血浆或其它标本基质的用法。

(iii) 不应使用黄 疸性血清或脂血血清，或显示溶血、微生物生长的血清。

(iv) 勿对血清进行热灭活。

(v) 开始分析前，请确保全部试剂均已平衡至室温 (20-25C)。本分析会受到温度变化影响。在微量孔达到室温 (20-25oC) 之前，勿从密封袋内取出。

(vi) 使用干净吸头直接从瓶内分配液体。转移试剂可能导致污染。

(vii) 未使用的微量孔应当立即重新密封并妥善贮存（放入干燥剂）。否则可能得出错误的结果。

(viii) 底物系统：

(a) TMB 对来自金属离子的污染敏感，因此勿使底物系统接触金属表面。

(b) 避免长时间暴露于直射光线。

(c) 某些去垢剂可能干扰 TMB 的性能。

(d) TMB 可能呈淡蓝色。这不会影响底物的活性或分析结果。

(ix) 某些试剂盒成分含有叠氮化钠，而叠氮化钠可与铅质或铜质管道起反应，形成高度爆炸性的金属氮化物。当通过管道系统处置这些试剂时，要用大量水冲洗以防止下水道内积聚氮化物。

(x) 叠氮化钠抑制缀合物活性。添加缀合物时必须使用清洁吸头，以免从其它试剂中带入叠氮化钠。

相关的详细安全信息，可参考 INVERNESS MEDICAL INNOVATIONS

AUSTRALIA提供的物质安全数据表 (MSDS)。

标本采集和制备

检验流程.............

注：开始分析前，请确保全部试剂均已平衡至室温 (20-25°C)。在规定的时间范围和温度范围外开展本分析可能产生无效结果。不符合已建立的时间和温度范围要求的分析必重新进行。

洗涤步骤.......................

计算............................

重要说明：校准系数是特定于批次的，在规格页有详细说明。在开始计算之前，需获得校准系数值。

质量控制

每个试剂盒均含有校准品、阳性对照品和阴性对照品。这些血清的可接受值可参见随后的规格页。 阴性对照品和阳性对照品旨在监测严重的试剂失效。 阳性对照品不确保分析界限值的 性。 若阴性或阳性对照品或校准品的吸光度读数不符合规格说明，则检验无效，应进行重复检验。若检验无效，则不能报告患者结果。必须按照当地、州或联邦规定或授权要求以及您实验室的标准 QC 措施执行质量控制 (QC)。建议用户参考 CLSI C24-A 和 42 CFR 493.1256，以获得正确的 QC规范指导。

结果的解释

指标 PANBIO 单位结果

<0.9 <9 阴性

0.9 – 1.1 9 – 11 不确定

>1.1 >11 阳性

结果解释..............

期望值和检验局限性

1. 临床诊断必须依据患者的临床病征和症 状加以解释。来自本试剂盒的结果本身并不是诊断性的，应当连同其它临床资料和患者症 状进行考虑。

2. 阳性预测值取决于病毒存在的可能性。检验应仅对具有临床症 状的患者或怀疑发生病毒感染时才开展。

3. 在 IgG 水平，常见黄病毒组范围内（即 1 型登 革热病毒、2 型登 革热病毒、3 型登 革热病毒和 4 型登 革热病毒、圣路易斯脑 炎病毒、Murray 谷脑 炎病毒等）的血清学交叉反应3,4,5。东南亚开展的试验表明，90% 的日本脑 炎患者 (n=20) 具有 >10 Panbio。

4. 界限值的确定基于当地人群。不同地理区域的群体血清流行病学可能随时间而变化。因此，界限值可能需根据当地的研究数据进行调整。

5. 目前尚未对可视结果的判定建立性能特征。

6. 通过 ELISA 筛查检验法显示感染的全部血清应提交至参考实验室，以证实阳性结果及流行病学记录。